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挑戰(zhàn)Amaxa,國產(chǎn)自主第三代電轉(zhuǎn)技術(shù)

作者:admin信息來源:達(dá)科為日期:2018年06月04日打印字體:  
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某些真核動物細(xì)胞,比如原代的T細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,和干細(xì)胞等,其特性決定了被廣泛使用的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等化學(xué)試劑法必定不可能獲得可接受的轉(zhuǎn)染效果。而病毒轉(zhuǎn)染的繁瑣程序和潛在危害性又使得大規(guī)模應(yīng)用病毒來解決這些細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實驗成為實驗者不愿意選擇的路徑。

 

15年前Amaxa技術(shù)出現(xiàn),改進(jìn)了古老的電轉(zhuǎn)技術(shù),針對真核細(xì)胞做了電擊波形和能量優(yōu)化,又特別提出了保護(hù)細(xì)胞在電擊瞬間的保護(hù)液(轉(zhuǎn)染液)配方,從而大幅提高了這些原代真核細(xì)胞電轉(zhuǎn)的效率和存活率,由于電轉(zhuǎn)導(dǎo)致的DNA進(jìn)入細(xì)胞特別快,從而蛋白表達(dá)也可在幾個小時內(nèi)觀察到,由此amaxa公司特別“制造”了一個詞“核轉(zhuǎn)染”來說明這種技術(shù)的優(yōu)越之處。由此,Amaxa定義了第二代電轉(zhuǎn)技術(shù)。(Amaxa公司后來被Lonza公司收購,進(jìn)來逐漸被稱為Lonza核轉(zhuǎn)染儀)

 

15年前,Amaxa技術(shù)是革命性改進(jìn),但是隨著人們越來越多的使用amaxa電轉(zhuǎn)設(shè)備,還是逐漸暴露出其一些固有缺陷。

amaxa技術(shù)基于美國ATCC所謂“標(biāo)準(zhǔn)”細(xì)胞而設(shè)定,但實際上實驗室內(nèi)使用的細(xì)胞都是本實驗室或者友好實驗室擴(kuò)增傳代一代一代傳下來的,其和ATCC標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞早已千差萬別。對于電轉(zhuǎn)這種在刀尖上跳舞:“增加一分則細(xì)胞電死,減少一分則細(xì)胞電不進(jìn)去”的原理,這種細(xì)胞性狀的細(xì)微差別就導(dǎo)致了電轉(zhuǎn)效果的巨大差別,這就是為什么大多數(shù)人反饋,達(dá)不到amaxa標(biāo)準(zhǔn)實驗Protocol上的電轉(zhuǎn)效果:別人明明是60%轉(zhuǎn)染效率,為什么我死活做出來就只有30%?

 

由于Amaxa設(shè)備是按照細(xì)胞類型編碼轉(zhuǎn)染程序,而為了防止技術(shù)泄密,其采用了過度保護(hù)的措施,每個程序編碼代號完全是亂碼字母數(shù)字,導(dǎo)致用戶完全無法針對本實驗室細(xì)胞對amaxa程序進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。也就是說,一旦轉(zhuǎn)染效果不理想,排除其它因素以外,如果確認(rèn)細(xì)胞不標(biāo)準(zhǔn),Amaxa/Lonza的技術(shù)人員就只能建議你去買ATCC的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞來滿足達(dá)到amaxa技術(shù)的效果。這是典型的“削足適履”,全球?qū)嶒炚邔Υ艘庖姸挤浅5拇蟆?

Amaxa技術(shù)考慮到了電擊和化學(xué)保護(hù)試劑的問題,但是在基本的電擊杯設(shè)計上依然保守了,采用了古老的狹縫U型電擊杯(第一代BioRad電擊技術(shù)采用的普通電擊杯)。這種電擊杯設(shè)計從電學(xué)物理原理上就必然會出現(xiàn)液面和貼壁區(qū)域大量細(xì)胞電死的問題。由于電擊杯的電學(xué)物理特性是整個儀器電學(xué)設(shè)計的核心基礎(chǔ),改進(jìn)電擊杯設(shè)計將導(dǎo)致整個機(jī)器系統(tǒng)都要重新設(shè)計,Amaxa設(shè)備已經(jīng)無法改變。更重要的是,其它電擊杯設(shè)計已經(jīng)被其它公司專利保護(hù)了,這包括我們下面提到的國產(chǎn)新第三代電轉(zhuǎn)設(shè)備的核心設(shè)計,amaxa技術(shù)已經(jīng)被阻擊,進(jìn)一步改進(jìn)升級的空間被堵死了。

Amaxa技術(shù)只有100ul和更小的20ul體系。100ul體系一次電轉(zhuǎn)也就是10^6級,這和脂質(zhì)體/病毒轉(zhuǎn)染可適應(yīng)10^6-10^9不可同日而語。這也是很多人為什么不選擇電轉(zhuǎn)路徑的重要原因之一。由于Amaxa已經(jīng)選擇了狹縫U型電擊杯的路線,這導(dǎo)致其無法加大細(xì)胞轉(zhuǎn)染量這一難題。近兩年Amaxa/Lonza公司推出了可一次做10^7-10^8轉(zhuǎn)染的新機(jī)器,但是基本原理依然基于100ul電轉(zhuǎn)反應(yīng)體系,無非是采用了復(fù)雜的流體系統(tǒng),通過多次自動連續(xù)進(jìn)樣,從而把一個本來一次可以完成的1ml或者10ml轉(zhuǎn)染分成了連續(xù)的10次或者100次轉(zhuǎn)染而已。可以看到這種錯誤技術(shù)路線導(dǎo)致這種解決方案的機(jī)器構(gòu)造復(fù)雜而價格昂貴,而耗材成本更是天價:一兩萬人民幣耗材做一個108細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,你能接受嗎?

 

現(xiàn)在,在電轉(zhuǎn)這一細(xì)分的細(xì)胞生物學(xué)高科技領(lǐng)域,中國人的科研力量已經(jīng)出現(xiàn)!已經(jīng)落地實現(xiàn)商業(yè)化。已經(jīng)加入激烈的市場競爭,正面挑戰(zhàn)amaxa技術(shù)!已經(jīng)在美國和中國多個重要科研院所(都是具有多臺amaxa設(shè)備,多年amaxa使用經(jīng)驗的實驗室)得以驗證,成功改寫了用戶的看法,實現(xiàn)了商業(yè)市場競爭的勝利。


Celetrix電轉(zhuǎn)儀,有幾大核心技術(shù)突破。

 

第一,重要的核心創(chuàng)新:加壓電擊管替代傳統(tǒng)U型電擊杯的設(shè)計。

 

加壓電擊管看起來和生物學(xué)實驗中使用很多的凍存管樣子類似,可是把它變成電擊管,卻從來沒有人想到。這種利用封閉電化學(xué)效應(yīng)的獨特創(chuàng)新使得真核細(xì)胞受到電擊的瞬態(tài)極為穩(wěn)定可靠,是基本原理的革新,從根源上解決了老式的電極杯和毛細(xì)管內(nèi)電場不均勻的問題。從而奠定了它具有更高電轉(zhuǎn)效率和更高細(xì)胞存活率的基礎(chǔ)原理的優(yōu)越性。從實踐看來,加壓電擊管在瞬間大電壓產(chǎn)生電轉(zhuǎn)效應(yīng)后,極少觀測到細(xì)胞死亡的“白沫”,充分說明了其核心理論的正確性,為進(jìn)一步改進(jìn)和發(fā)展這一新時代的電轉(zhuǎn)技術(shù)提供了基本物理基礎(chǔ)。目前這一電擊管設(shè)計已經(jīng)申請了美國和中國專利,從而堵死了amaxa技術(shù)進(jìn)一步改進(jìn)的空間。

第二,可以通過簡單擴(kuò)大加壓電擊管的容積來實現(xiàn)大容量細(xì)胞電轉(zhuǎn)。

 

這種電擊管的新一代設(shè)計提供了一種可能,只要獲得大能量電流的控制能力,理論上就可以通過簡單增大電擊管的容積來實現(xiàn)一次性的大容量細(xì)胞電轉(zhuǎn)。目前Celetrix已經(jīng)可以提供一次性電擊1ml (約10^8細(xì)胞)的設(shè)備,無論從結(jié)果的可靠性(一次電轉(zhuǎn),而不是10次100ul電轉(zhuǎn)相加),簡單易用,耗材成本大幅度降低等角度,這都是未來大容量細(xì)胞電轉(zhuǎn)的必然發(fā)展趨勢。

第三,針對Amaxa技術(shù)的缺陷,使得用戶自調(diào)節(jié)電轉(zhuǎn)參數(shù)稱為簡單易用的事情。

 

用戶簡單調(diào)節(jié)一兩個數(shù)值,就可以微調(diào)細(xì)胞電轉(zhuǎn)條件,從而獲得真正的“自己實驗室的細(xì)胞”的適合電轉(zhuǎn)條件,而不是這一類(比如:Amaxa設(shè)備上 人T細(xì)胞類 的固定程序,固定電轉(zhuǎn)參數(shù))的參數(shù),從而能得到符合當(dāng)前實驗室細(xì)胞情況的結(jié)果。

第四,針對Amaxa技術(shù)非常高昂的試劑耗材價格,Celetrix大幅降低了日常使用成本,只有Amaxa同等條件(100ul體系)的約50-60%價格。如果用戶電轉(zhuǎn)更多容量,Celetrix提供200ul一次,和1ml一次的容量,那節(jié)約的試劑耗材就更是只有幾分之一甚至十分之一了。這就是核心技術(shù)改進(jìn)帶來的成本優(yōu)勢。

目前,Celetrix剛剛面試不到兩年,但已有美國耶魯大學(xué),哈佛大學(xué),NIH;也有中國國內(nèi)的中科院,北京大學(xué),等近百家實驗室使用,這些使用者都是原Amaxa技術(shù)的重度使用者,非常了解兩者之間的區(qū)別,他們的選擇不僅僅是對中國技術(shù)和產(chǎn)品的信任,根源還是對第三代電轉(zhuǎn)技術(shù)(如果說Amaxa技術(shù)是第二代電轉(zhuǎn)技術(shù))優(yōu)越性的認(rèn)可。

 

達(dá)科為生物作為Celetrix產(chǎn)品在中國的總代理商,歡迎使用過Amaxa產(chǎn)品的科研人員來電來信咨詢和進(jìn)行對比測試。我們愿為這一優(yōu)秀民族工業(yè)產(chǎn)品和世界性的創(chuàng)新產(chǎn)品提供力所能及的支持和服務(wù)。


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